Javascript je momentálne vo vašom prehliadači zakázaný.Keď je javascript zakázaný, niektoré funkcie tejto webovej stránky nebudú fungovať.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalánsko, Španielsko * Títo autori majú určité poznatky o tejto práci Equal pozadie príspevku: Kyselina hyalurónová (HA) je prirodzene sa vyskytujúci polysacharid používaný pri výrobe dermálnych výplní na estetické účely.Keďže má v ľudských tkanivách polčas rozpadu niekoľko dní, dermálne výplne na báze HA sú chemicky upravované, aby sa predĺžila ich životnosť v tele.Najbežnejšou modifikáciou komerčných plnív na báze HA je použitie 1,4-butándiol diglycidyléteru (BDDE) ako sieťovacieho činidla na zosieťovanie reťazcov HA.Zvyškový alebo nezreagovaný BDDE sa považuje za netoxický pri <2 častice na milión (ppm);preto sa musí zvyškový BDDE v konečnej dermálnej výplni kvantifikovať, aby sa zaistila bezpečnosť pacienta.Materiály a metódy: Táto štúdia opisuje detekciu a charakterizáciu vedľajšieho produktu zosieťovacej reakcie medzi BDDE a HA v alkalických podmienkach kombináciou kvapalinovej chromatografie a hmotnostnej spektrometrie (LC-MS).Výsledky: Po rôznych analýzach sa zistilo, že alkalické podmienky a vysoká teplota použité na dezinfekciu hydrogélu HA-BDDE podporili tvorbu tohto nového vedľajšieho produktu, zlúčeniny „podobnej propylénglykolu“.LC-MS analýza potvrdila, že vedľajší produkt má rovnakú monoizotopickú hmotnosť ako BDDE, odlišný retenčný čas (tR) a odlišný mód UV absorbancie (A=200 nm).Na rozdiel od BDDE sa pri LC-MS analýze pozorovalo, že za rovnakých podmienok merania má tento vedľajší produkt vyššiu rýchlosť detekcie pri 200 nm.Záver: Tieto výsledky naznačujú, že v štruktúre tejto novej zlúčeniny nie je žiadny epoxid.Diskusia je otvorená na posúdenie rizika tohto nového vedľajšieho produktu, ktorý sa nachádza pri výrobe hydrogélu HA-BDDE (dermálna výplň HA) na komerčné účely.Kľúčové slová: kyselina hyalurónová, dermálna výplň HA, zosieťovaná kyselina hyalurónová, BDDE, LC-MS analýza, vedľajší produkt BDDE.
Výplne na báze kyseliny hyalurónovej (HA) sú najbežnejšie a najobľúbenejšie dermálne výplne používané na kozmetické účely.1 Toto dermálne plnivo je hydrogél, zvyčajne zložený z > 95 % vody a 0,5 – 3 % HA, čo mu dáva gélovitú štruktúru.2 HA je polysacharid a hlavná zložka extracelulárnej matrice stavovcov.Jedna zo zložiek.Pozostáva z opakujúcich sa disacharidových jednotiek kyseliny (1,4)-glukurónovej-β (1,3)-N-acetylglukózamínu (GlcNAc) spojených glykozidickými väzbami.Tento disacharidový vzorec je rovnaký vo všetkých organizmoch.V porovnaní s niektorými plnivami na báze bielkovín (ako je kolagén) táto vlastnosť robí z HA vysoko biokompatibilnú molekulu.Tieto plnivá môžu vykazovať špecifickosť aminokyselinovej sekvencie, ktorá môže byť rozpoznaná imunitným systémom pacienta.
Pri použití ako dermálna výplň je hlavným obmedzením HA jej rýchly obrat v tkanivách v dôsledku prítomnosti špecifickej rodiny enzýmov nazývaných hyaluronidázy.Doteraz bolo popísaných niekoľko chemických modifikácií v štruktúre HA na zvýšenie polčasu rozpadu HA v tkanivách.Väčšina týchto modifikácií sa pokúša znížiť prístup hyaluronidázy k polysacharidovým polymérom zosieťovaním HA reťazcov.Preto v dôsledku tvorby mostíkov a intermolekulárnych kovalentných väzieb medzi štruktúrou HA a sieťovacím činidlom vytvára zosieťovaný hydrogél HA viac produktov degradácie antienzýmov ako prirodzený HA.4-6
Doteraz chemické sieťovacie činidlá používané na výrobu zosieťovaného HA zahŕňajú metakrylamid, 7 hydrazid, 8 karbodiimid, 9 divinylsulfón, 1,4-butándiol diglycidyléter (BDDE) a poly(etylénglykol) diglycidyléter.10,11 BDDE je v súčasnosti najbežnejšie používaným sieťovacím činidlom.Hoci sa tieto typy hydrogélov osvedčili ako bezpečné už desaťročia, použité sieťovacie činidlá sú reaktívne činidlá, ktoré môžu byť cytotoxické a v niektorých prípadoch mutagénne.12 Preto musí byť ich zvyškový obsah v konečnom hydrogéle vysoký.BDDE sa považuje za bezpečné, ak je zvyšková koncentrácia nižšia ako 2 častice na milión (ppm).4
Existuje niekoľko metód na detekciu nízkozvyškovej koncentrácie BDDE, stupňa zosieťovania a polohy substitúcie v hydrogéloch HA, ako je plynová chromatografia, vylučovacia chromatografia spojená s hmotnostnou spektrometriou (MS), metódy merania fluorescencie pomocou nukleárnej magnetickej rezonancie (NMR) a Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) spojená s diódovým poľom.13-17 Táto štúdia opisuje detekciu a charakterizáciu vedľajšieho produktu v konečnom zosieťovanom hydrogéle HA produkovanom reakciou BDDE a HA za alkalických podmienok.HPLC a kvapalinová chromatografia-hmotnostná spektrometria (LC-MS analýza).Keďže toxicita tohto vedľajšieho produktu BDDE nie je známa, odporúčame, aby sa kvantifikácia jeho rezíduí stanovila podobným spôsobom, ako sa zvyčajne používa na BDDE v konečnom produkte.
Získaná sodná soľ HA (Shiseido Co., Ltd., Tokio, Japonsko) má molekulovú hmotnosť ~1 368 000 Da (Laurentova metóda) 18 a vnútornú viskozitu 2,20 m3/kg.Na zosieťovaciu reakciu bol BDDE (> 95 %) zakúpený od Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Fosfátom pufrovaný fyziologický roztok s pH 7,4 bol zakúpený od Sigma-Aldrich Company.Všetky rozpúšťadlá, acetonitril a voda použité v LC-MS analýze boli zakúpené od kvality HPLC.Kyselina mravčia (98 %) sa kupuje ako reagent.
Všetky experimenty sa uskutočňovali na systéme UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) a pripojili sa k trojitému kvadrupólovému hmotnostnému spektrometru API 3000 vybavenému zdrojom elektrosprejovej ionizácie (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Syntéza zosieťovaných hydrogélov HA sa začala pridaním 198 mg BDDE do 10 % (hmotn./hmotn.) roztoku hyaluronátu sodného (NaHA) v prítomnosti 1 % alkálie (hydroxid sodný, NaOH).Konečná koncentrácia BDDE v reakčnej zmesi bola 9,9 mg/ml (0,049 mM).Potom bola reakčná zmes dôkladne premiešaná a homogenizovaná a ponechaná prebiehať pri 45 °C počas 4 hodín.19 pH reakcie sa udržiava na -12.
Potom sa reakčná zmes premyla vodou a výsledný hydrogél HA-BDDE sa prefiltroval a zriedil pufrom PBS, aby sa dosiahla koncentrácia HA 10 až 25 mg/ml a konečné pH 7,4.Na sterilizáciu vyrobených zosieťovaných hydrogélov HA sa všetky tieto hydrogély autoklávujú (120 °C počas 20 minút).Purifikovaný hydrogél BDDE-HA sa skladuje pri 4 °C až do analýzy.
Na analýzu BDDE prítomného v produkte zosieťovaného HA sa odvážila 240 mg vzorka a vložila sa do stredového otvoru (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; objem 0,5 ml) a centrifugovala sa pri 10 000 ot./min. pri teplote miestnosti. 10 minút.Celkovo sa zhromaždilo a analyzovalo 20 ul sťahovacej kvapaliny.
Aby bolo možné analyzovať štandard BDDE (Sigma-Aldrich Co) v alkalických podmienkach (1%, 0,1% a 0,01% NaOH), ak sú splnené nasledujúce podmienky, kvapalná vzorka je 1:10, 1:100 alebo až 1:1 000 000 V prípade potreby použite na analýzu deionizovanú vodu MilliQ.
Pre východiskové materiály použité v zosieťovacej reakcii (HA 2%, H20, 1% NaOH a 0,049 mM BDDE) sa 1 ml každej vzorky pripravenej z týchto materiálov analyzoval použitím rovnakých analytických podmienok.
Na stanovenie špecificity píkov objavujúcich sa na iónovej mape sa do 20 ul vzorky pridalo 10 ul 100 ppb štandardného roztoku BDDE (Sigma-Aldrich Co).V tomto prípade je konečná koncentrácia štandardu v každej vzorke 37 ppb.
Najprv pripravte zásobný roztok BDDE s koncentráciou 11 000 mg/l (11 000 ppm) zriedením 10 μl štandardného BDDE (Sigma-Aldrich Co) s 990 μl vody MilliQ (hustota 1,1 g/ml).Tento roztok použite na prípravu roztoku 110 µg/l (110 ppb) BDDE ako stredného štandardného riedenia.Potom použite prechodné štandardné riedidlo BDDE (110 ppb) na prípravu štandardnej krivky niekoľkonásobným zriedením prechodného riedidla, aby ste dosiahli požadovanú koncentráciu 75, 50, 25, 10 a 1 ppb.Ako je znázornené na obrázku 1, zistilo sa, že štandardná krivka BDDE od 1,1 do 110 ppb má dobrú linearitu (R2>0,99).Štandardná krivka sa opakovala v štyroch nezávislých experimentoch.
Obrázok 1 BDDE štandardná kalibračná krivka získaná LC-MS analýzou, v ktorej je pozorovaná dobrá korelácia (R2>0,99).
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria.
Na identifikáciu a kvantifikáciu štandardov BDDE prítomných v zosieťovanom HA a štandardov BDDE v základnom roztoku sa použila analýza LC-MS.
Chromatografická separácia bola dosiahnutá na LUNA 2,5 um C18(2)-HST kolóne (50 x 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) a udržiavaná pri teplote miestnosti (25 °C) počas analýzy.Mobilná fáza pozostáva z acetonitrilu (rozpúšťadlo A) a vody (rozpúšťadlo B) s obsahom 0,1 % kyseliny mravčej.Mobilná fáza sa eluuje gradientovou elúciou.Gradient je nasledujúci: 0 minút, 2 % A;1 minúta, 2 % A;6 minút, 98 % A;7 minút, 98 % A;7,1 minúty, 2 % A;10 minút, 2 % A. Doba spracovania je 10 minút a objem injekcie je 20 µl.Retenčný čas BDDE je približne 3,48 minúty (v rozmedzí od 3,43 do 4,14 minúty na základe experimentov).Mobilná fáza sa čerpala prietokovou rýchlosťou 0,25 ml/min na analýzu LC-MS.
Na analýzu BDDE a kvantifikáciu pomocou MS sa systém UPLC (Waters) kombinuje s trojitým kvadrupólovým hmotnostným spektrometrom API 3000 (AB SCIEX) vybaveným elektrosprejovým ionizačným zdrojom a analýza sa uskutočňuje v režime pozitívnych iónov (ESI+).
Podľa analýzy iónových fragmentov vykonanej na BDDE sa určilo, že fragment s najvyššou intenzitou je fragment zodpovedajúci 129,1 Da (obrázok 6).Preto v režime multiiónového monitorovania (MIM) na kvantifikáciu je hmotnostná konverzia (pomer hmotnosti k náboju [m/z]) BDDE 203,3/129,1 Da.Používa tiež režim úplného skenovania (FS) a režim skenovania iónov produktu (PIS) na analýzu LC-MS.
Aby sa overila špecifickosť metódy, analyzovala sa slepá vzorka (počiatočná mobilná fáza).V slepej vzorke s hmotnostnou konverziou 203,3/129,1 Da sa nezistil žiadny signál.Čo sa týka opakovateľnosti experimentu, analyzovalo sa 10 štandardných nástrekov 55 ppb (v strede kalibračnej krivky), čo viedlo k reziduálnej štandardnej odchýlke (RSD) < 5 % (údaje nie sú uvedené).
Zvyškový obsah BDDE sa kvantifikoval v ôsmich rôznych autoklávovaných hydrogéloch HA zosieťovaných s BDDE, čo zodpovedá štyrom nezávislým experimentom.Ako je opísané v časti „Materiály a metódy“, kvantifikácia sa vyhodnocuje priemernou hodnotou regresnej krivky štandardného riedenia BDDE, ktorá zodpovedá jedinečnému píku zistenému pri hmotnostnom prechode BDDE 203,3/129,1 Da, s retenčným čas 3,43 až 4,14 minúty Nečakať.Obrázok 2 ukazuje príklad chromatogramu 10 ppb BDDE referenčného štandardu.Tabuľka 1 sumarizuje zvyškový obsah BDDE v ôsmich rôznych hydrogéloch.Rozsah hodnôt je 1 až 2,46 ppb.Preto je zvyšková koncentrácia BDDE vo vzorke prijateľná na použitie u ľudí (<2 ppm).
Obrázok 2 Iónový chromatogram 10 ppb BDDE referenčného štandardu (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) prechod získaný LC-MS analýzou 203,30/129,10 Da (v pozitívnom MRM móde).
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, monitorovanie viacerých reakcií;MS, hmotnosť;m/z, pomer hmotnosti k náboju.
Poznámka: Vzorky 1-8 sú autoklávované hydrogély HA zosieťované pomocou BDDE.Uvádza sa aj zvyškové množstvo BDDE v hydrogéli a vrchol retenčného času BDDE.Nakoniec sa uvádza aj existencia nových píkov s rôznymi retenčnými časmi.
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;HA, kyselina hyalurónová;MRM, monitorovanie viacerých reakcií;tR, retenčný čas;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;RRT, relatívny retenčný čas.
Analýza LC-MS iónového chromatogramu prekvapivo ukázala, že na základe všetkých analyzovaných autoklávovaných zosieťovaných HA hydrogélových vzoriek bol ďalší pík pri kratšom retenčnom čase 2,73 až 3,29 minúty.Napríklad obrázok 3 ukazuje iónový chromatogram vzorky zosieťovaného HA, kde sa ďalší pík objavuje pri inom retenčnom čase približne 2,71 minúty.Zistilo sa, že pozorovaný relatívny retenčný čas (RRT) medzi novo pozorovaným vrcholom a vrcholom z BDDE je 0,79 (tabuľka 1).Pretože vieme, že novo pozorovaný pík je menej zadržaný v C18 kolóne použitej v LC-MS analýze, nový pík môže zodpovedať polárnejšej zlúčenine ako BDDE.
Obrázok 3 Iónový chromatogram vzorky zosieťovaného hydrogélu HA získanej pomocou LC-MS (hmotnostná konverzia MRM 203,3/129,0 Da).
Skratky: HA, kyselina hyalurónová;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, monitorovanie viacerých reakcií;RRT, relatívny retenčný čas;tR, retenčný čas.
Aby sa vylúčila možnosť, že nové pozorované píky môžu byť kontaminanty pôvodne prítomné v použitých surovinách, tieto suroviny sa tiež analyzovali pomocou rovnakej metódy analýzy LC-MS.Medzi analyzované východiskové materiály patrí voda, 2 % NaHA vo vode, 1 % NaOH vo vode a BDDE v rovnakej koncentrácii, aká sa používa pri zosieťovacej reakcii.Iónový chromatogram použitého východiskového materiálu neukázal žiadnu zlúčeninu ani pík a jeho retenčný čas zodpovedá novému pozorovanému píku.Táto skutočnosť zavrhuje myšlienku, že nielen východiskový materiál môže obsahovať akékoľvek zlúčeniny alebo látky, ktoré môžu interferovať s postupom analýzy, ale neexistujú žiadne známky možnej krížovej kontaminácie s inými laboratórnymi produktmi.Hodnoty koncentrácie získané po LC-MS analýze BDDE a nových píkov sú uvedené v tabuľke 2 (vzorky 1-4) a iónový chromatogram na obrázku 4.
Poznámka: Vzorky 1-4 zodpovedajú surovinám použitým na výrobu autoklávovaných hydrogélov HA zosieťovaných BDDE.Tieto vzorky neboli autoklávované.
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;HA, kyselina hyalurónová;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, sledovanie viacerých reakcií.
Obrázok 4 zodpovedá LC-MS chromatogramu vzorky suroviny použitej v zosieťovacej reakcii HA a BDDE.
Poznámka: Všetky sú merané pri rovnakej koncentrácii a pomere, aký sa používa na uskutočnenie zosieťovacej reakcie.Čísla pre suroviny analyzované chromatogramom zodpovedajú: (1) vode, (2) 2 % vodnému roztoku HA, (3) 1 % vodnému roztoku NaOH.Uskutoční sa LC-MS analýza pre hmotnostnú konverziu 203,30/129,10 Da (v pozitívnom MRM režime).
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;HA, kyselina hyalurónová;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, sledovanie viacerých reakcií.
Študovali sa podmienky, ktoré viedli k vytvoreniu nových vrcholov.Aby sa študovalo, ako reakčné podmienky použité na výrobu zosieťovaného hydrogélu HA ovplyvňujú reaktivitu sieťovacieho činidla BDDE, čo vedie k tvorbe nových píkov (možných vedľajších produktov), boli vykonané rôzne merania.Pri týchto stanoveniach sme študovali a analyzovali konečný BDDE zosieťujúci prostriedok, ktorý bol ošetrený rôznymi koncentráciami NaOH (0 %, 1 %, 0,1 % a 0,01 %) vo vodnom médiu, po čom nasledovalo autoklávovanie alebo bez neho.Bakteriálny postup na simuláciu rovnakých podmienok je rovnaký ako metóda použitá na výrobu zosieťovaného hydrogélu HA.Ako je opísané v časti „Materiály a metódy“, hmotnostný prechod vzorky sa analyzoval pomocou LC-MS na 203,30/129,10 Da.Vypočíta sa BDDE a koncentrácia nového píku a výsledky sú uvedené v tabuľke 3. Vo vzorkách, ktoré neboli autoklávované, sa nezistili žiadne nové píky, bez ohľadu na prítomnosť NaOH v roztoku (vzorky 1-4, tab. 3).V prípade autoklávovaných vzoriek sa nové píky detegujú len v prítomnosti NaOH v roztoku a zdá sa, že tvorba píku závisí od koncentrácie NaOH v roztoku (vzorky 5-8, tabuľka 3) (RRT = 0,79).Obrázok 5 ukazuje príklad iónového chromatogramu, ktorý ukazuje dve autoklávované vzorky v prítomnosti alebo neprítomnosti NAOH.
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, sledovanie viacerých reakcií.
Poznámka: Horný chromatogram: Vzorka sa spracuje s 0,1 % vodným roztokom NaOH a autoklávuje (120 °C počas 20 minút).Spodný chromatogram: Vzorka nebola ošetrená NaOH, ale bola autoklávovaná za rovnakých podmienok.Hmotnostná konverzia 203,30/129,10 Da (v pozitívnom MRM režime) sa analyzovala pomocou LC-MS.
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, sledovanie viacerých reakcií.
Vo všetkých autoklávovaných vzorkách, s alebo bez NaOH, bola koncentrácia BDDE značne znížená (až 16,6-krát) (vzorky 5-8, tabuľka 2).Pokles koncentrácie BDDE môže byť spôsobený skutočnosťou, že pri vysokých teplotách môže voda pôsobiť ako báza (nukleofil) na otvorenie epoxidového kruhu BDDE za vzniku 1,2-diolové zlúčeniny.Monoizotopová kvalita tejto zlúčeniny je odlišná od kvality BDDE, a preto nebude ovplyvnená.LC-MS detegovala hmotnostný posun 203,30/129,10 Da.
Nakoniec tieto experimenty ukazujú, že generovanie nových píkov závisí od prítomnosti BDDE, NAOH a procesu autoklávovania, ale nemá nič spoločné s HA.
Nový pík zistený pri retenčnom čase približne 2,71 minúty sa potom charakterizoval pomocou LC-MS.Na tento účel sa BDDE (9,9 mg/ml) inkuboval v 1 % vodnom roztoku NaOH a autoklávoval.V tabuľke 4 sú charakteristiky nového vrcholu porovnané so známym referenčným vrcholom BDDE (retenčný čas približne 3,47 minúty).Na základe analýzy iónovej fragmentácie dvoch píkov možno usúdiť, že pík s retenčným časom 2,72 minúty vykazuje rovnaké fragmenty ako pík BDDE, ale s rôznymi intenzitami (obrázok 6).Pre vrchol zodpovedajúci retenčnému času (PIS) 2,72 minúty bol pozorovaný intenzívnejší vrchol po fragmentácii pri hmotnosti 147 Da.Pri koncentrácii BDDE (9,9 mg/ml) použitej pri tomto stanovení boli po chromatografickej separácii tiež pozorované rôzne režimy absorbancie (UV, A=200 nm) v ultrafialovom spektre (obrázok 7).Pík s retenčným časom 2,71 minúty je stále viditeľný pri 200 nm, zatiaľ čo pík BDDE nie je možné pozorovať na chromatograme za rovnakých podmienok.
Tabuľka 4 Výsledky charakterizácie nového píku s retenčným časom približne 2,71 minúty a píku BDDE s retenčným časom 3,47 minúty
Poznámka: Na získanie týchto výsledkov sa uskutočnili LC-MS a HPLC analýzy (MRM a PIS) na dvoch vrcholoch.Na HPLC analýzu sa používa UV detekcia s vlnovou dĺžkou 200 nm.
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;HPLC, vysokoúčinná kvapalinová chromatografia;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, monitorovanie viacerých reakcií;m/z, pomer hmotnosti k náboju;PIS, produkt iónové skenovanie;ultrafialové svetlo, ultrafialové svetlo.
Poznámka: Hmotnostné fragmenty sa získajú analýzou LC-MS (PIS).Vrchný chromatogram: hmotnostné spektrum fragmentov štandardnej vzorky BDDE.Spodný chromatogram: Hmotnostné spektrum detegovaného nového píku (RRT spojené s píkom BDDE je 0,79).BDDE bol spracovaný v 1% roztoku NaOH a autoklávovaný.
Skratky: BDDE, 1,4-butándiol diglycidyléter;LC-MS, kvapalinová chromatografia a hmotnostná spektrometria;MRM, monitorovanie viacerých reakcií;PIS, produktové iónové skenovanie;RRT, relatívny retenčný čas.
Obrázok 7 Iónový chromatogram prekurzorového iónu 203,30 Da a (A) nový pík s retenčným časom 2,71 minúty a (B) UV detekcia píku referenčného štandardu BDDE pri 3,46 minúte pri 200 nm.
Vo všetkých vyrobených zosieťovaných hydrogéloch HA sa pozorovalo, že zvyšková koncentrácia BDDE po kvantifikácii LC-MS bola <2 ppm, ale v analýze sa objavil nový neznámy vrchol.Tento nový vrchol nezodpovedá štandardnému produktu BDDE.Štandardný produkt BDDE tiež prešiel analýzou konverzie rovnakej kvality (konverzia MRM 203,30/129,10 Da) v pozitívnom režime MRM.Vo všeobecnosti sa ako limitné testy na detekciu BDDE v hydrogéloch používajú iné analytické metódy, ako je chromatografia, ale maximálny detekčný limit (LOD) je o niečo nižší ako 2 ppm.Na druhej strane, NMR a MS sa doteraz používali na charakterizáciu stupňa zosieťovania a/alebo modifikácie HA vo fragmentoch cukrových jednotiek zosieťovaných produktov HA.Účelom týchto techník nikdy nebolo kvantifikovať zvyškovú detekciu BDDE pri takých nízkych koncentráciách, aké popisujeme v tomto článku (LOD našej metódy LC-MS = 10 ppb).
Čas odoslania: 01.09.2021